新型重组Ulp1的制备工艺研究

作者：徐海悦; 吴勇; 李乐乐; 黄宗庆; 化浩举; 冯军^*

来源：中国医药工业杂志, 2022, 53(10): 1432-1438.

DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2022.10.008

• 小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)蛋白酶
• 类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)
• 重组
• 表达
• 纯化
• 离子交换色谱

类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)是从融合蛋白中移除小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)标签工艺中的重要工具蛋白酶，在重组多肽和蛋白生产制备中具有广泛应用。Ulp1蛋白易聚集的特性给下游分离纯化工艺带来了诸多挑战。为克服这些问题，本研究设计并重组表达制备了一种S13-Ulp1融合蛋白，以提高Ulp1酶的溶解度，减少聚集，同时降低蛋白等电点，便于采用阴离子交换色谱纯化。通过对发酵、澄清等步骤的工艺参数进行优化，建立了一条发酵表达产量高、纯化工艺简便的S13-Ulp1融合蛋白制备工艺。优化后发酵产量达到了2.34 g/L，下游分离纯化总收率为64%，制得的S13-Ulp1蛋白的SDS-PAGE纯度为95%。经酶切试验验证，S13-Ulp1融合蛋白具有与Ulp1相同的特异性，可高效地移除SUMO标签，获得目的多肽。

• 单位
  中国医药工业研究总院