基于液相PNA-FISH技术的单增李斯特菌检测方法研究

作者：杨彤; 李可; 叶子弘; 吴姗; 张晓峰^*; 帅江冰^*

来源：中国预防兽医学报, 2020, 42(12): 1255-1261.

• 肽核酸
• 荧光原位杂交
• 单增李斯特菌

为了提高单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的检测效率和检测通量,本研究在前期初步建立的液相肽核酸荧光原位杂交(PNA-FISH)检测方法基础上,分别采用50%酒精加4%多聚甲醛和80%酒精加PBS两种杂交前处理方式进行细菌固定试验。结果显示,两种方法在95%的置信区间内无显著性差异,PBS可代替多聚甲醛使用。本研究进一步利用特异性探针Lm-16S-2初步建立单增李斯特菌液相PNA-FISH方法,特异性试验结果显示,该方法与17株常见单增李斯特菌杂交的荧光值明显高于阴性对照,而8株非单增李斯特菌和14株非李斯特菌杂交的荧光值与阴性对照无差别,表明该方法特异性强;将单增李斯特菌菌液10倍倍比稀释(101cfu/mL～108cfu/mL)后同时利用该方法及传统细菌生化鉴定法检测,进行敏感性试验。结果显示,该方法与传统细菌生化鉴定法敏感性相同,对单增李斯特菌的检测限均为104cfu/mL,敏感性较高。对8个批次不同种单增李斯特菌进行重复性试验,结果显示批内和批间荧光值变异系数均小于5%,重复性好;经更换不同实验室及操作人员后检测同一批次不同浓度的单增李斯特菌,结果显示试验结果可以重复再现,稳定性好。对28份家禽组织样品经国标法增菌培养后采用液相PNA-FISH方法检测,结果显示该方法与传统细菌生化鉴定法检测单增李斯特菌的符合率达到100%,并大大缩减检测时间。本研究建立的单增李斯特菌液相PNA-FISH方法能够高效、快速、准确的检测单增李斯特菌,为该菌的检测提供了一种可行技术手段。

• 单位
  生命科学学院; 浙江省检验检疫科学技术研究院; 中国计量大学