溶藻弧菌ThiC蛋白的原核表达及其乙酰化修饰鉴定

作者：王旭东; 范晨龙; 丁燏

来源：大连海洋大学学报, 2021, 1-10.

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2021-148

• 溶藻弧菌
• ThiC
• 原核表达
• 乙酰化

为构建溶藻弧菌HY9901 ThiC蛋白的原核表达载体、优化其表达条件，并鉴定该蛋白是否存在乙酰化修饰。以溶藻弧菌HY9901基因组为模板，PCR扩增ThiC基因，构建pET-28a-ThiC原核表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达，并优化其表达条件，然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果表明：溶藻弧菌ThiC基因长度为1941 bp；重组蛋白成功在大肠杆菌BL21中表达（相对分子质量为72 500），其最佳诱导条件为0.1 mmol/L IPTG 37 ℃诱导3 h；Western blot结果显示，ThiC蛋白具有乙酰化修饰，但在体外不能通过乙酰化酶途径去乙酰化。研究表明，溶藻弧菌ThiC原核表达载体构建成功，该蛋白存在乙酰化修饰，但体外不能去乙酰化，本研究结果果为溶藻弧菌维生素营养的翻译后调控机制研究奠定了基础。

• 单位
  广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室; 广东省水产经济动物病害控制重点实验室; 广东海洋大学