去甲斑蝥素对神经母细胞瘤细胞增殖的影响

作者：王晓晖; 张书峰^*; 高建; 王霖

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2022, 36(04): 337-340.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2022.04.004

• 神经母细胞瘤
• 去甲斑蝥素
• C-MYC基因
• 增殖

目的 探讨去甲斑蝥素(norcantharidin, NCTD)对神经母细胞瘤细胞增殖的影响及其对C-MYC基因表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR法检测人神经母细胞瘤细胞SK-N-BE、SK-SY5Y、CHLA-119、SK-N-AS及人星形胶质细胞NHA c-Myc mRNA相对表达量，选择与NHA细胞c-Myc mRNA相对表达量差异最大的SK-N-AS细胞进行后续试验。对数生长期SK-N-AS细胞分为NCTD组(给予50μmol/L NCTD处理)和对照组(加入等体积细胞培养液),采用MTS法检测2组培养第1～5天细胞增殖的吸光度值，采用BrdU摄入实验检测2组培养第1天细胞BrdU摄入指数，采用实时荧光定量PCR法检测2组培养第4天c-Myc mRNA相对表达量，采用Western blot法检测2组培养第4天细胞c-Myc蛋白相对表达量。构建C-MYC基因的慢病毒过表达质粒和空白对照慢病毒质粒，将对数生长期SK-N-AS细胞分为NCTD+c-Myc组(加入50μmol/L NCTD及转染c-Myc过表达慢病毒质粒)、NCTD对照组(加入50μmol/L NCTD)、空白对照组(转染空白对照慢病毒质粒),采用MTS法检测3组培养第1～5天细胞增殖的吸光度值，采用Western blot法检测3组培养第4天细胞c-Myc蛋白相对表达量。结果 SK-N-BE、SK-SY5Y、CHLA-119、SK-N-AS细胞c-Myc mRNA相对表达量(2.04±0.34、2.34±0.55、2.70±0.76、4.54±0.58)均高于NHA细胞(1.02±0.23)(P<0.05),SK-N-AS细胞c-Myc mRNA相对表达量与NHA细胞差异最大，选择SK-N-AS细胞进行后续实验。培养第3～5天，NCTD组细胞增殖的吸光度值均高于对照组(P<0.05);培养第1天，NCTD组细胞BrdU摄入指数(0.56±0.12)低于对照组(1.11±0.25)(t=3.429,P=0.027);培养第4天，NCTD组细胞c-Myc mRNA(0.53±0.19)和c-Myc蛋白(0.11±0.00)相对表达量均低于对照组(0.96±0.16、1.00±0.01)(t=3.086,P=0.003;t=133.900,P<0.001)。培养第3～5天，空白对照组和NCTD+c-Myc组细胞增殖的吸光度值高于NCTD对照组(P<0.05),NCTD+c-Myc组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);培养第4天，NCTD+c-Myc组和空白对照组细胞c-Myc蛋白相对表达量(0.79±0.12、0.83±0.05)均高于NCTD对照组(0.44±0.23)(P<0.05),空白对照组与NCTD+c-Myc组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NCTD通过抑制C-MYC基因的表达抑制神经母细胞瘤细胞增殖。

• 单位
  河南省人民医院; 郑州大学