急性髓系白血病(AML)中hsacirc0000254的实验研究

作者：俞露; 李强; 邓刚; 李晓芳; 钱煦岱; 孙涛; 俞石芳

来源：中国实验血液学杂志, 2018, 26(03): 647-652.

DOI：10.7534/j.issn.1009-2137.2018.03.003

• 急性髓系白血病
• 环状RNA
• hsacirc0000254
• pLCDH-ciR载体
• 载体构建

目的:通过克隆环状RNA hsacirc0000254,构建过表达载体并初步鉴定其表达水平,为进一步的功能研究奠定基础。方法:人工合成hsacirc0000254的524 bp序列,用pGH克隆载体合成基因,然后酶切目的片段,连接到慢病毒过表达载体pLCDH-ciR中,测序验证。筛选阳性克隆,分别以pLCDH-circ254(C254)、NC(pLCDH-ciR)转染293T细胞,培养40 h后收集细胞进行PCR检测及产物测序验证。结果:pLCDH-circ254表达载体经测序验证,测序峰图正常,且无杂峰或叠带,序列对比吻合,表明hsacirc0000254成功插入环状RNA表达载体pLCDHciR,过表达载体构建成功,表达效率高达1万倍。结论:成功构建hsacirc0000254表达载体,可高效表达hsacirc0000254。

• 单位
  浙江省中医院; 浙江大学医学院附属第二医院; 宁波市中心血站