稳定表达RAS鸟苷酸释放因子2肺癌细胞株的建立

作者：王勇; 陈虹; 卜友泉

来源：中国生物制品学杂志, 2012, 25(02): 164-167.

DOI：10.13200/j.cjb.2012.02.41.wangy.032

• RAS鸟苷酸释放因子2
• 真核细胞
• 基因表达
• 肺肿瘤

目的构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株。方法用SgfⅠ和NotⅠ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位。经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达。结果经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中;重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达;经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达。结论成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院