野生型和突变型GPⅢa真核表达载体的构建与鉴定

作者：张丽梅; 刘彦虹; 刘枫晨; 胡惠静

来源：国际免疫学杂志, 2011, (04): 321-324.

• 聚合酶链式反应
• GPⅢa
• pcDNA3.1(+)

目的构建人野生型和突变型血小板糖蛋白Ⅲa(GPⅢa)真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)Ⅲa和pcDNA3.1(+)Ⅲa~(T1565C)。方法选择人红白血病细胞提取人基因组总RNA,经过逆转录-聚合酶链反应后,采用定点诱变技术,通过三轮聚合酶链式反应将第2外显子1565位基因由T置换为C,把最终产物与质粒pcDNA3.1(+)连接,构建突变型质粒pcDNA3.1(+)Ⅲa。结合同时构建的野生型pcDNA3.1(+)Ⅲa,采用阳离子脂质体法进行共转染到CHO细胞中,通过流式细胞术鉴定野生型和突变型pcDNA3.1(+)Ⅲa在CHO细胞的表达情况。结果通过DNA测序,成功获得人野生型和突变型pcDNA3.1 Ⅲa重组质粒,转染至CHO经FCM检测均有GPⅢa表达。结论①成功构建了野生型和突变型真核表达载体pcDNA3.1(+)Ⅲa和pcDNA3.1(+)Ⅲa T1565C;②获得野生型和突变型GPⅢa的CHO细胞系。

• 单位
  哈尔滨医科大学附属第二医院