补肾止颤方调控miR-296-5p /GSDMD通路抑制帕金森病大鼠神经元焦亡机制研究

作者：胡玉英; 李伦甘; 刘永辉; 宋曦; 钟洁; 张志伟; 王晋平; 罗荣卿; 黄羽

来源：中华中医药学刊, 2022, 1-22.

• 补肾止颤方
• 帕金森病
• miR-296-5p/GSDMD
• 细胞焦亡
• 神经保护

目的 从焦亡角度探讨补肾止颤方保护帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）大鼠中脑黑质区神经元的作用以及可能机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，补肾止颤方低(15g·kg-1)、中(30g·kg-1)、高(60g·kg-1)剂量组，美多芭组(0.2g·kg-1)。除正常组外，余各组予背部皮下注射蛋白酶体抑制因子I（ProteasomeinhibitorsI，PSI）溶液构建慢性PD模型。模型组与正常组予等体积生理盐水灌胃，余各组予对应药物剂量灌胃，连续干预3周。采用行为学观察爬杆试验评估各组大鼠行为学改变，予透射电镜观察大鼠中脑黑质区神经元细胞结构变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（RealTimeQuantitativePCR，RT-qPCR）检测大鼠中脑黑质区miR-296-5P及GasderminD（GSDMD）蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）的mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测α-突触核蛋白（α-synuclein，α-syn）、酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase，TH）蛋白表达；双荧光素酶报告基因技术测定miR-296-5p与GSDMD上的靶向调控作用。结果 与正常组比较，余各组大鼠出现自主活动减少、全身不自主震颤、行走迟缓等症状，悬挂试验评分下降（P＜0.05）；电镜下可见神经元细胞呈不同程度的水肿，部分细胞膜结构模糊，细胞核不规则形，细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMDmRNA表达明显升高（P＜0.05），TH及miR-296-5p表达水平明显下降（P＜0.05）。与模型组对比，补肾止颤方低、中、高剂量组大鼠全身不自主震颤、行走迟缓等症状改善，悬挂试验评分升高（P＜0.05），细胞水肿减轻，细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMDmRNA表达呈不同程度下降（P＜0.05），TH及miR-296-5p表达水平升高（P＜0.05），以补肾止颤方高剂量组改变显著；荧光素酶报告显示miR-296-5p可靶向调控GSDMD的表达。结论 补肾止颤方能改善PD大鼠的运动协调能力及受损的神经元细胞，其机制可能与调控miR-296-5p/GSDMD通路，下调Caspase-1蛋白及炎性因子水平，减轻神经炎症反应，从而抑制PD大鼠神经元细胞焦亡有关。

• 单位
  广西中医药大学第一附属医院; 广西中医药大学