MiR140-5p在HepG2细胞中对对氧磷酶1表达的调控及其临床应用

作者：刘佳星; 王冰; 邢继成; 何玉杰; 杨爱珍; 邱红^*

来源：临床检验杂志, 2019, 37(02): 137-141.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2019.02.14

• miR140-5p
• 对氧磷酶1
• HepG2细胞
• 非酒精性脂肪性肝炎

目的探讨微小RNA(miRNA)对对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)表达的影响及其在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)患者中的临床应用价值。方法采用生物信息学方法对PON1相关调控miRNA进行预测分析;构建PON1荧光素酶报告基因载体,分析双荧光素酶活性;在HepG2细胞中上/下调miRNA水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组miRNA的表达情况,并采用western blot检测HepG2细胞中PON1蛋白的表达水平;采用qRT-PCR分析健康人群和NASH患者血清中miR140-5p的水平。结果 Target Scan数据库预测到miR140-5p能与PON13’-UTR端互补结合。双荧光素酶报告基因活性分析显示,miR-140-5p模拟物对PON1野生型载体的报告荧光有明显的下调作用(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与正常细胞对照组、模拟物阴性对照组相比,miR-140-5p模拟物组均呈现出过表达(P<0.01),而miR-140-5p抑制剂组则出现相应的低表达(P<0.05)。western blot结果表明,转染miR140-5p模拟物对PON1有明显的下调作用(P<0.01),而miR140-5p抑制剂对PON1有明显的上调作用(P<0.01)。与健康人对照组相比,NASH患者血清中miR140-5p表达水平降低(P<0.01)。结论 miR140-5p可能通过对PON1的转录后水平基因表达调控,参与NASH的进展。

• 单位
  中国人民解放军第八一医院; 安徽医科大学