重组蛋白HSP65-6×(IA2-P2)-His的构建、表达及分离纯化

作者：李泰明; 韩萌萌; 林旋; 刘俊; 吴洁; 金亮; 刘景晶; 徐茂磊

来源：安徽医药, 2013, (05): 732-734.

• 重组蛋白
• 发酵
• 纯化
• 鉴定 recombinant protein
• fermentation
• purification
• identification

目的构建HSP65-6×(IA2-P2)-His表达载体并研究其在大肠杆菌中的表达及分离纯化。方法通过酶切酶连的方法将6×(IA2-P2)-His替换pET-28a-HSP65-6×P277中的6×P277,构建好的载体经DNA测序分析构建成功。乳糖诱导表达的蛋白经Ni+柱分离纯化。最后用SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白。结果 HSP65-6×(IA2-P2)-His最高表达量占菌体总蛋白的65%,超声破碎后蛋白以可溶性的形式存在于裂解上清中。Ni+柱纯化后蛋白纯度可达80%电泳纯以上。最后West-ern blot鉴定目的蛋白具有抗原性和His标签。结论重组载体pET-...

• 单位
  天然药物活性物质与功能国家重点实验室; 中国药科大学