基于HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1活性测定方法的建立与评价

作者：秦红岩; 寇佳昕; 宋佩佩; 刘亚琦; 袁圆; 王璨; 魏玉辉^*

来源：中国临床药理学杂志, 2019, 35(04): 392-395.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2019.04.021

• 4-氨基水杨酸
• HepaRG细胞系
• N-乙酰基转移酶1
• 酶活性测定

目的建立基于人类肝癌HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)活性测定方法,并对其测定结果进行评价。方法 HepaRG细胞用含10%牛血清和青、链霉素培养液进行培养。用免疫印迹技术考察培养24,48和72 h的HepaRG细胞中NAT1表达情况;用噻唑蓝实验测定NAT1底物4-氨基水杨酸(4-ASA)孵育24和48 h对细胞活力的影响,分别用液-质联用技术及免疫印迹技术考察不同浓度4-ASA对HepaRG细胞中NAT1活性及蛋白表达的影响,比较基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法与传统组织/细胞裂解法对NAT1活性测定结果的影响。结果与培养24 h的HepaRG细胞相比(0. 71±4. 00×10-3),培养48和72 h的HepaRG细胞中NAT1的表达量显著增加,分别为(0. 80±7. 00×10-3)和(1. 04±0. 04),差异均有统计学意义(均P <0. 05)。与对照组相比,浓度为5～100μmol·L-1的4-ASA孵育HepaRG细胞24和48 h,对其活力无明显影响(均P> 0. 05); 25～100μmol·L-1的4-ASA孵育HepaRG细胞8 h,对NAT1蛋白表达无明显影响(均P> 0. 05),且50～75μmol·L-1的4-ASA孵育HepaRG细胞,培养液中4-ASA代谢物的生成量与底物浓度成正比。NAT1活性测定结果显示,HepaRG活细胞法测得的结果略低于传统的组织/细胞裂解法所测得的结果(P <0. 05或P <0. 01),但两者的酶促反应趋势比较相似。结论以4-ASA为反应底物建立的基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法具有操作简单、结果稳定、可动态检测等优势,有望用于NAT1活性的动态测定及NAT1特异性抑制的高通量筛选。

• 单位
  第二临床医学院; 第一临床医学院; 兰州大学; 兰州大学第一医院