一种无标记且实时检测CD19 CAR-T细胞杀伤功能的方法

作者：徐溪悦; 刘庶慈; 汤安群; 马文; 郑骏年; 刘丹; 施明^*

来源：医学研究生学报, 2020, 33(08): 844-849.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2020.08.012

• CD19
• CAR-T
• 杀伤功能
• 实时
• 无标记

目的应用放射性同位素51Cr释放检测、乳酸脱氢酶释放检测等方法体外检测CD19 CAR-T细胞操作繁琐,可重复性低,稳定性差。文章拟建立一种无标记、实时检测CD19 CAR-T细胞杀伤功能的方法。方法应用过表达CD19的慢病毒载体感染贴壁生长肿瘤细胞,应用流式细胞术检测在贴壁生长肿瘤细胞中过表达CD19的效果,应用流式细胞分选术建立稳定过表达CD19的贴壁生长肿瘤细胞株。以该细胞为靶细胞,以CD19 CAR-T细胞和BCMA CAR-T细胞为效应细胞,应用实时细胞分析(RTCA)系统检测效应细胞对靶细胞的杀伤。结果流式细胞术检测结果显示,经嘌呤霉素加压筛选后,99.03%的MDA-MB-231/CD19细胞为CD19阳性表达,而母本MDA-MB-231细胞为CD19阴性表达。SKBR3/CD19细胞中CD19阳性细胞为83.10%,存在17%的CD19阴性细胞。单克隆细胞株CD19阳性细胞为98.91%左右,而母本SKBR3细胞为CD19阴性表达。以MDA-MB-231和MDA-MB-231/CD19细胞为靶细胞时,在效靶比为5∶1、1∶1和1∶5的情况下,CD19 CAR-T细胞可有效杀伤MDA-MB-231/CD19细胞,但对MDA-MB-231细胞无明显杀伤作用。MDA-MB-231或SKBR3均不表达BCMA。将MDA-MB-231/CD19作为靶细胞,CD19 CAR-T作为效应细胞的数据单独分析,在靶细胞数量一致的情况下,RTCA检测到的杀伤效应随CD19 CAR-T细胞的数量增加而增加。RTCA检测结果显示,以SKBR3和SKBR3/CD19为靶细胞,在效靶比为5∶1和1∶1时,CD19 CAR-T细胞可显著杀伤SKBR3/CD19细胞,而BCMA CAR-T细胞对SKBR3/CD19细胞无显著的杀伤效应。在效靶比为1:5时,CD19 CAR-T细胞对SKBR3/CD19细胞无明显的杀伤效应。将SKBR3/CD19作为靶细胞,CD19 CAR-T作为效应细胞的数据单独分析,在靶细胞数量一致的情况下,RTCA检测到的杀伤效应随CAR-T细胞的数量增加而增加。结论建立了一种体外检测CD19 CAR-T细胞杀伤功能的方法,该方法具有实时、无标记、简便等优势。

• 单位
  徐州医科大学