p53及其凋亡刺激蛋白对结肠癌细胞自噬和凋亡影响机制探讨

作者：封晓昆; 王贲士; 王安娜; 陈德喜; 郭洪亮

来源：中华肿瘤防治杂志, 2015, 22(10): 752-757.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2015.10.006

• p53
• p53凋亡刺激蛋白2
• ASPP异构体
• 自噬
• 细胞凋亡

目的探讨p53、p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2of p53,ASPP2)及异构体ΔASPP2在p53缺陷结肠癌细胞系HCT116-/-细胞中对自噬及凋亡的影响。方法实验分为对照组、MMS组、MMS+p53组、MMS+ASPP2+p53组、MMS+ΔASPP2+p53组和MMS+ASPP2+ΔASPP2+p53组。应用ASPP2、ΔASPP2及p53质粒转染HCT116-/-细胞,同时转染绿色荧光GFP-LC3质粒于各组细胞中,经甲基磺酸(MMS)处理后用荧光显微镜观察细胞自噬水平,蛋白质印迹法检测各组细胞自噬及凋亡相关蛋白表达水平,Calcein AM/PI染色检测细胞凋亡水平。结果自噬水平对照组为(0.63±0.14)%,MMS组为(10.48±0.58)%,MMS+p53组为(5.45±0.41)%,MMS+ASPP2+p53组为(3.43±0.35)%,MMS+ΔASPP2+p53组为(14.84±0.64)%,MMS+ASPP2+ΔASPP2+p53组为(12.29±0.58)%,差异有统计学意义,F=1 182.364,P<0.001;与MMS组比较,MMS+p53组和MMS+ASPP2+p53组自噬水平下降,P值均<0.001;与MMS+p53组相比,MMS+ASPP2+p53组自噬水平降低,P<0.001;MMS+ΔASPP2+p53组自噬水平较MMS+p53处理组增加,P<0.001;MMS+ASPP2+ΔASPP2+p53组自噬水平较MMS+ASPP2+p53组增加,P<0.001。凋亡率比较,对照组为(2.09±0.54)%,MMS组为(16.79±0.69)%,MMS+p53组为(33.70±1.16)%,MMS+ASPP2+p53组为(50.61±1.17)%,MMS+ΔASPP2+p53组为(21.32±1.18)%,MMS+ASPP2+ΔASPP2+p53组为(35.22±1.06)%,差异有统计学意义,F=2 571.942,P<0.001;MMS+p53和MMS+ASPP2+p53组凋亡较MMS组增加,P值均<0.001;与MMS+p53组相比,MMS+ASPP2+p53组凋亡增加,P<0.001;MMS+ΔASPP2+p53组凋亡较MMS+p53组减少,P<0.001;MMS+ASPP2+ΔASPP2+p53组凋亡较MMS+ASPP2+p53组也有所降低,P<0.001。结论 ASPP2能够增强p53的自噬抑制作用,并增强p53促细胞凋亡作用,ΔASPP2能够抑制ASPP2与p53的功能,具有促进细胞自噬,抑制细胞凋亡的作用。

• 单位
  生命科学学院; 山东省肿瘤医院; 济南大学; 山东省医学科学院