鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的构建

作者：高肖芳; 刘子中; 李文亮; 王红朵; 杨瑞馥; 韩延平

来源：军事医学, 2017, 41(10): 800-804.

• 鼠疫菌
• 小RNA
• λ-Red同源重组
• 过表达

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测了目的小RNA的存在、大小以及转录起始位点等,将目的小RNA的全长导入到改造后的质粒中并构建小RNA的过表达菌株。结果与结论成功构建了小RNA sR01、sR02、sR03、HmsA 4株缺失株以及小RNA MicF、HmsA、CpxQ 3株过表达菌株。建立了基于λ-Red同源重组、100 nt以内短片段小RNA敲除方法和基于定点突变试剂盒改造质粒的小RNA过表达菌株构建方法。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 安徽医科大学; 军事医学科学院