花生MITE反应体系优化及其遗传多样性分析

作者：徐彪; 王佰众; 李玉发; 杨翔宇; 王伟; 牛海龙; 李伟堂; 刘红欣; 吴松权^*; 何中国^*

来源：山东农业科学, 2022, 54(01): 1-6.

DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2022.01.001

• 花生
• AhMITE标记
• 反应体系优化
• 遗传多样性分析

为了建立适宜不同来源花生种质遗传差异分析的MITE反应体系,本研究从反应体系总量、Taq PCR Mix用量、引物浓度、模板DNA浓度及退火温度、循环次数方面对反应体系进行优化,得到的最佳反应体系为:反应总体积10μL,模板DNA 20 ng,引物(15μmol/L)2μL,Taq PCR Mix 5μL。反应程序为95℃预变性3 min; 95℃变性30 s, 58℃退火40 s, 72℃延伸30 s,循环32次;72℃延伸10 min; 4℃保存。利用优化的反应体系从50对AhMITE引物中筛选出11对多态性高的引物,并用于对22份不同来源的花生种质进行遗传多样性分析。结果表明,共扩增出23条带,其中,多态性带21条,多态性比例为91.3%,每个引物平均扩增的多态性带为1.91条。种质间遗传相似系数在0.222～0.957之间,平均值为0.644;通过NTSYS-pc Version 2.1软件基于UPGMA法进行聚类图绘制,在遗传相似系数为0.62时可将22份花生种质分为3大类。表明经过优化的AhMITE反应体系可以有效地用于不同来源花生种质的遗传多样性分析,表现出良好的多态性,可为进一步使用AhMITE标记对花生品种鉴定和遗传图谱构建奠定基础。

• 单位
  吉林省农业科学院; 延边大学