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摘要
旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫（扬州株）配子体总RNA，RT-PCR扩增EnGPX的ORF编码序列，构建原核表达质粒pET-28a(+)-EnGPX，转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达，同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体，对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明，EnGPX ORF序列全长753 bp，编码250个氨基酸，体外重组表达蛋白大小约30 ku，主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体，鼠抗rEnGPX多克隆抗体，毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别，表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测到了EnGPX，其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体（WFBII）及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX，验证其具有良好的反应原性，并定位于配子体及卵囊壁上。为研究EnGPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索，为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。
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