离子交换和疏水层析法代替盐析沉淀技术精制破伤风毒素初探

作者：田贝贝; 崔晓峰; 郭旺; 孙伟; 李津; 安文珏; 潘若文; 高新灿^*

来源：微生物学免疫学进展, 2023, 51(04): 25-29.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2023.04.005

• 破伤风毒素
• 离子交换层析
• 疏水层析
• 纯度
• 纯化

目的 用离子交换+疏水层析法代替传统的盐析沉淀技术制备高纯度精制破伤风毒素。方法 破伤风毒素浓缩液经Q Sepharose Fast Flow (QFF)离子交换层析去除杂蛋白，将收集到目标蛋白破伤风毒素经2.0 mol/L硫酸铵-磷酸盐缓冲液等量稀释后，再用Phenyl SepharoseTM 6 Fast Flow (high sub)疏水层析去除大部分杂质及色素制得纯度较高的精制破伤风毒素。结果 用离子交换+疏水层析法纯化破伤风毒素实验重复3次，精制破伤风毒素絮状单位平均值达到3 600 Lf/mL,纯度平均值为100%,精制破伤风毒素的特异蛋白条带相对分子质量分别在148 000～153 000、98 000～103 000、53 000～57 000范围内。与盐析法相比，离子交换+疏水层析法各项指标均有较大提高。结论 离子交换+疏水层析法能有效、稳定地制备符合要求的精制破伤风毒素。在破伤风毒素的纯化中，离子交换+疏水层析法可取代传统的盐析沉淀技术。