一株滑液囊支原体的分离鉴定及其磷酸丙糖异构酶（Tpi）和丙酮酸激酶（PK）抗体制备

作者：连丽燕; 巩新民; 郭龙宗; 李玉燕; 蒋蔚; 陈兆国; 祁克宗; 魏晓峰; 韩先干

来源：中国动物传染病学报, 2021, 1-11.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20210924.001

• 滑液囊支原体
• 磷酸丙糖异构酶
• 丙酮酸激酶
• 抗体制备

磷酸丙糖异构酶（Triosephosphate isomerase，Tpi）和丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）是滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae， MS)进行糖酵解的关键酶，牛支原体(Mycoplasma bovis)和鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)的Tpi（tpiA基因编码）和PK（pyk基因编码）位于细胞膜和细胞质上，参与对宿主细胞的粘附，而MS的tpiA和pyk分别编码Tpi和Pyk，目前尚未见相关研究。本研究首先对临床分离的MS分离株的生长特性进行研究，然后使用Overlap PCR对tpiA和pyk进行点突变扩增，分别将其克隆至pET-28a载体并在BL21（DE3）中表达，用获得的TpiA和Pyk蛋白免疫新西兰兔制备多抗。结果表明，分离的MS分离株(MS-SD2020) 最高生长滴定为10~(9)，在生长60 h时达到最高滴定；对tpiA和pyk的序列进行分析表明，其在不同MS中高度保守，并成功表达大小分别为35.28和63.36 kDa的TpiA和Pyk重组蛋白，免疫后制备的兔多抗效价分别为32000和2048000，本研究为后续开展MS的TpiA和Pyk功能研究提供参考。

• 单位
  上海实验动物研究中心; 安徽农业大学; 山东益生种畜禽股份有限公司; 中国农业科学院上海兽医研究所