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摘要
猪圆环病毒2型(PCV2)作为无囊膜单股负链环状DNA病毒，能引起感染猪的免疫抑制，是猪圆环病毒相关疾病的主要病原体，广泛传播于世界各地，给全球养猪业造成了巨大损失。为探究地西他滨(DAC)对PCV2增殖的影响及其作用机制。本研究构建了感染PCV2的PK-15细胞模型，使用CCK-8法检测DAC对PK-15细胞的细胞毒性，进而使用荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western blot检测DAC对PCV2增殖水平的影响；通过间接免疫荧光法标记5甲基胞嘧啶表征DAC对细胞基因组DNA全局甲基化的影响；通过RNA干扰技术在PK-15细胞中沉默DAC的作用靶点DNA甲基转移酶1(Dnmt1),进一步探究DAC抑制PCV2增殖的作用机理。结果显示，DAC在20μmol·L-1时才具有轻微的细胞毒性，并在浓度为10μmol·L-1时即表现出明显的抗PCV2活性，可以抑制不同时间的PCV2增殖。DAC处理细胞后能显著降低PK-15细胞基因组DNA的甲基化，并诱导Ⅰ型干扰素(Ⅰ-IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达。沉默DAC的作用靶点Dnmt1能显著抑制PCV2的增殖，且同样诱导I-IFN和ISGs的表达。本研究证实DAC能够有效抑制PCV2的增殖，且发现DAC能促进I-IFN和ISGs的表达并抑制DNA的甲基化，推测DAC抗PCV2病毒的功能与I-IFN和ISGs的表达上调有关，提示DAC具备开发成PCV2临床抗病毒药物的潜力，还揭示Dnmt1是激活宿主固有免疫抗病毒通路的潜在靶点，为新的PCV2抗病毒药物研发提供理论依据。
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