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摘要
目的探讨蛋白营养不良和能量营养不良状态下脓毒症大鼠凝血的变化。方法将108只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组36只。正常喂养组给予含18%蛋白饲料27 g/d自由饮食;蛋白营养不良组给予含5%蛋白饲料27 g/d低蛋白自由饮食;能量营养不良组给予含18%蛋白饲料9 g/d低能量饮食。连续喂养4周后,从各组分别选取8只大鼠进行营养不良评价,称量体重以及胸腺、脾脏重量,应用流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群比例和M1型巨噬细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆白细胞介素(IL-6、IL-10)水平。各组剩余28只大鼠用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,其中20只用于Kaplan-Meier生存分析;其余8只于术后8 h处死,采用ELISA法检测血浆IL-6、IL-10水平,应用流式细胞仪检测脾脏M1型巨噬细胞比例,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏组织因子(TF)及凝血酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的mRNA表达。采用Pearson相关法对CLP术后大鼠TF、PAI-1的mRNA表达与IL-6进行相关性分析。结果① 4周喂养结束后,正常喂养组和蛋白营养不良组大鼠体重增加,而能量营养不良组丢失初始体重的25%;蛋白营养不良组及能量营养不良组大鼠体重、胸腺和脾脏重量均明显低于正常喂养组。与正常喂养组和蛋白营养不良组比较,能量营养不良组大鼠脾脏CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、M1型巨噬细胞比例以及血浆IL-6水平均明显升高〔CD3+T淋巴细胞比例:(52.1±3.7)%比(46.9±3.9)%、(44.5±2.2)%,CD4+T淋巴细胞比例:(35.0±3.6)%比(26.3±2.2)%、(25.1±2.3)%,M1型巨噬细胞比例:(8.7±2.0)%比(3.2±1.3)%、(4.2±1.1)%,IL-6(ng/L):129.4±16.2比48.1±10.0、53.0±8.3,均P<0.05〕。② CLP术后7 d Kaplan-Meier生存分析显示,能量营养不良组大鼠全部死亡,7 d累积生存率明显低于正常喂养组和蛋白营养不良组〔0%(0/20)比35%(7/20)、55%(11/20),均P<0.05〕。正常喂养组大鼠死亡率为65%,符合中度脓毒症死亡率,说明CLP模型制备成功。CLP术后,蛋白营养不良组大鼠血浆IL-6水平明显低于正常喂养组〔IL-6(ng/L):154.6±34.7比233.4±41.2,P<0.05〕;能量营养不良组大鼠肝脏TF、PAI-1的mRNA表达和血浆IL-6水平均明显高于正常喂养组〔TF mRNA(2-ΔΔCT):4.5±2.2比1.1±0.7,PAI-1 mRNA(2-ΔΔCT):3.3±1.8比1.3±0.9,IL-6(ng/L):382.7±118.2比233.4±41.2,均P<0.05〕,脾脏M1型巨噬细胞比例明显低于正常喂养组〔(8.9±2.4)%比(15.2±5.4)%,P<0.05〕。各组大鼠血浆IL-10水平比较差异均无统计学意义。相关分析显示,CLP术后大鼠肝脏TF、PAI-1 mRNA表达与血浆IL-6水平均呈显著正相关(r1=0.644、r2=0.574,均P<0.01)。结论长期持续应激(饥饿)导致大鼠持续慢性炎症状态,并在感染后刺激相关炎性因子释放及凝血系统激活,无持续应激的蛋白营养不良脓毒症大鼠炎性因子释放明显减少。
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单位中国医科大学附属第一医院
