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摘要
目的：建立高效液相色谱（HPLC）-1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）在线筛选系统分析杜仲叶抗氧化活性成分；应用制备型高效液相色谱（Prep-HPLC）和高速逆流色谱仪（HSCCC）建立抗氧化成分的富集和分离方法。方法：采用大孔树脂AB-8对杜仲叶的提取物进行分离，收集水洗脱组分，采用HPLC-DPPH在线检测系统筛选抗氧化活性成分；应用Prep-HPLC对筛选目标抗氧化活性成分建立富集方法，并应用HSCCC纯化抗氧化活性成分。同时，结合分子对接和体外DPPH自由基清除率对其进行抗氧化活性评价。结果：采用HPLC-DPPH在线筛选系统及Prep-HPLC建立抗氧化活性成分的筛选和富集方法，并应用HSCCC色谱进一步分离纯化5个抗氧化活性成分，分别为儿茶素（1）、绿原酸（2）、咖啡酸（3）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（4）和槲皮素（5）；通过分子对接和体外抗氧化活性实验进一步验证该5种化合物的抗氧化活性。分子对接显示，5种成分的结合能范围为-6.4～-4.8 kcal/mol，其中儿茶素和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷的结合能最大；体外DPPH自由基清除率显示，5种成分对DPPH自由基清除能力由大到小依次为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、儿茶素、槲皮素、咖啡酸、绿原酸。结论：应用HPLC-DPPH在线筛选系统和Prep-HPLC能够有效筛选和富集天然产物中的抗氧化活性成分，同时应用HSCCC能够实现活性成分的进一步纯化；分离得到的抗氧化活性成分中，儿茶素和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷均表现出较强的抗氧化活性。
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