猪IgG1-Fc与圆环病毒3型Cap融合基因的原核表达与分析

作者：周玲玲; 连凯琪^*; 张明亮; 王英杰; 张慢; 宋玉伟; 张福良

来源：黑龙江畜牧兽医, 2019, (17): 97-100.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.10.0006

• Fc片段
• 猪圆环病毒3型
• Cap融合基因
• 原核表达
• 可溶性

为了探索猪Ig G1-Fc(pIgG1-Fc)与猪圆环病毒3型(PCV-3) Cap融合基因在大肠杆菌中的表达效果,试验采用PCR方法扩增pIgG1-Fc-Cap136～645融合基因,通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc-Cap136～645,使用SDS-PAGE和Western-blot方法对该重组质粒进行原核表达与鉴定,并进行可溶性分析。结果表明:PCR扩增得到pIgG1-Fc-Cap136～645融合基因,大小为1 221 bp,共编码407个氨基酸,并成功构建重组质粒pET30a(+)-p IgG1-Fc-Cap136～645;该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得表达,表达的融合蛋白分子质量约为53. 0 ku,在25℃、IPTG终浓度为0. 5 mmol/L、诱导8小时时,重组蛋白pIgG1-Fc-Cap136～645的表达量最高,且主要以包涵体形式表达。

• 单位
  安阳工学院