siRNA沉默肺癌细胞中RECQL4基因表达诱导癌细胞凋亡的机制研究

作者：***; 胡红军; 郭喜喜; 张立国^*

来源：中华生物医学工程杂志, 2019, (05).

• RECQL4基因
• 凋亡
• 氧化应激

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默RECQL4基因对人肺癌A549细胞凋亡的影响及分子机制。方法 采用qRT-PCR检测人支气管上皮HBE细胞及不同肺癌细胞A549、NCI-H1975和NCI-H1299细胞中RECQL4基因的表达情况。将RECQL4两条特异性siRNA分别转染至A549细胞中(分别记为si-RECQL4-1组和si-RECQL4-2组),转染无功能siRNA的A549细胞为阴性对照(NC组),未转染的A549细胞为空白对照(Blank组)。转染48 h后以qRT-PCR检测各组A549细胞中RECQL4 mRNA表达量,免疫印迹检测RECQL4、Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平。Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况。DCFH-DA探针技术检测细胞中活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果 与HBE细胞相比,A549、NCI-H1975和NCI-H1299细胞中RECQL4的表达量明显升高(P<0.05),A549细胞中RECQL4的表达量明显高于NCI-H1975和NCI-H1299细胞(P<0.05)。转染两种RECQL4 siRNA均能明显抑制A549细胞中RECQL4 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),其中si-RECQL4-1组沉默效果更好。与Blank组相比,si-RECQL4-1组A549细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达及ROS和MDA含量明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平和GSH含量明显降低(P<0.05)。结论 siRNA沉默肺癌A549细胞中RECQL4基因表达能够诱导细胞凋亡,其作用机制与调控凋亡相关蛋白表达及氧化应激有关。

• 单位
  新乡市中心医院