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摘要
本实验室前期构建了缺失I226R基因的非洲猪瘟病毒(ASFV)减毒株SY18△I226R,将其高、低单剂量(分别为107TCID50和104TCID50)接种家猪21 d后，对致死剂量ASFV SY18毒株的攻击，免疫猪均能达到100%保护，具有作为ASF疫苗候选株的潜力。为了能够有效区别家猪感染ASFV野毒株和SY18△I226R减毒株，本试验从ASFV SY18株基因组中扩增得到I226R基因片段，克隆到原核表达载体pET32a,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后诱导表达，纯化后获得I226R蛋白(pI226R)。以纯化的pI226R为包被抗原，以不同缺失毒免疫猪或自然毒感染康复猪血清为检测对象，建立了针对pI226R抗体的间接ELISA检测方法。结果显示，pI226R重组质粒在BL21(DE3)细胞中经IPTG诱导表达，获得的蛋白大小为28 kDa。以pI226R为包被抗原的间接ELISA检测结果显示，该方法对阴性猪血清和SY18△I226R疫苗候选株接种猪血清检测的D450 nm值均≤0.381;ASFV自然感染猪血清和其他基因缺失株抗体水平的D450 nm值均>0.381,与其他ASFV抗体检测试剂盒如p30或p54等配合，可有效鉴别I226R基因缺失株接种和其他毒株感染，具有重要潜在应用价值。
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