人参皂苷Rb3糖基水解酶的纯化及其反应特性

作者：张睿哲; 徐龙权; 宋建国; 鱼红闪^*

来源：广西植物, 2020, 40(05): 706-714.

• 人参皂苷Rb3
• 人参皂苷Rb3糖基水解酶
• 酶学性质
• 酶分离纯化
• 酶促反应动力学

人参皂苷Rb3是三七茎叶皂苷的主要成分。为了充分利用廉价的三七茎叶皂苷,该研究以微生物Aspergillus sp. P90r菌为对象,综合运用生物转化的方法,经过提取、分离纯化和酶活力测定等步骤,最终以确定酶反应途径的方式得到了所产的特异性人参皂苷Rb3糖基水解酶的相关性质和动力学等反应特性。结果表明:该酶比Absidia sp. GRB3-X8r菌产酶活力高15%25%,SDS-PAGE电泳结果测得分子量约为65.6ku,纯化后酶蛋白的含量为0.237 mg·mL-1,蛋白比活力可达到169 U·mg-1,纯化倍数为13.70,回收率为9.39%。人参皂苷Rb3糖基水解酶在pH=5.0的偏酸性环境下酶活力很高,最适反应条件:pH=3.05.0,温度45℃,其中在pH=4.06.0范围内相对稳定。该酶在20 min时进入混合级反应,酶反应米氏常数Km值为8.77 mmol·L-1,Vmax为57.44 mmol·L-1·h-1,在60 min时反应速度达到最大,Vmax趋于稳定,为66.63mmol·L-1·h-1。通过对酶的催化特性研究表明,该酶先水解Rb3的20-O-木糖基,其次水解3-O-葡萄糖基,最终催化反应产物中有F2和C-K生成。综上结果,微生物Aspergillus sp. P90r菌酶具有能水解人参皂苷Rb3木糖基和葡萄糖基的特异性。

• 单位
  生物工程学院; 大连工业大学