WT1基因增强子构建位点对WT1基因启动子转录活性的影响

作者：胡绍燕; 陈子兴; 顾伟英; 赵晔; 岑建农; 傅铮铮; 何军; 谷敏

来源：中国病理生理杂志, 2008, 24(02): 209-214.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2008.02.001

• 启动子,WT1基因
• 增强子,WT1基因
• 插入位点

目的:以WT1基因启动子和增强子的功能片段为研究对象,探讨增强子构建在质粒的不同位点对基因启动子转录活性的影响。方法:利用基因重组技术将WT1基因增强子的功能片段分别插入在已含有WT1基因启动子的质粒,pEWP的不同位点(MCS中的BamHI、EGFP终止密码后的NotI和SV40polyA位点后的AflⅡ)中,将重组质粒转染慢粒白血病红白急变细胞株K562细胞、乳腺癌细胞株MCF-7细胞和人类胚胎肾转化细胞株293细胞,通过检测转基因细胞中EGFP的平均荧光强度来评估增强子对启动子的转录促进作用。结果:通过基因重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体,即pEWP,和含有WT1基因启动子和增强子的载体,即pEWPE、pEWPD和pEWPA。流式细胞仪检测EGFP的平均荧光强度,发现pEWPA在293细胞和K562细胞中能够增强WT1启动子的转录活性,而pEWPE和pEWPD则无增强作用。3者均不能在MCF7细胞中增强WT1启动子的转录活性。结论:SV40polyA位点后插入增强子能够有效地增强启动子的转录活性,且具有细胞特异性。

• 单位
  苏州大学附属儿童医院; 苏州大学附属第三医院; 苏州大学附属第一医院