高原鼠兔ISSR引物反应体系的优化与筛选

作者：葛艳丽; 慈海鑫; 唐利洲; 林恭华; 苏建平

来源：安徽农业科学, 2008, (33): 14422-14424+14430.

• 高原鼠兔
• ISSR
• 优化PCR Ochotona curzoniae
• ISSR
• Optimizing PCR

[目的]筛选和优化高原鼠兔(Ochotona curzoniae)适宜的ISSR反应体系,以在对高原鼠兔进行ISSR分析时获得清晰和多态性好的扩增结果。[方法]以高原鼠兔基因组DNA为模板,通过单因素试验,对体系中的模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶用量、引物用量、退火温度进行探讨。[结果]结果表明,高原鼠兔ISSR-PCR扩增的最佳条件为:25μl PCR反应体系,其中4lμDNA模板,1.5 mmol/LMgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,1.25 UTaq聚合酶,1.5μmol/L引物,复性温度4560℃(退火温度随引物不同而确定)。用11条引物进行了PCR扩增,...

• 单位
  中国科学院; 中国科学院西北高原生物研究所; 中国科学院大学