含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

作者：李曼; 黄晨; 张伟; 王增禄; 李晶; 杜锐; 孙世仁; 张鹏; 张英起

来源：生物技术通讯, 2011, (02): 158-162.

• 蛋白转导域
• SARA/SBD融合蛋白
• 原核表达
• 纯化
• 生物学活性 protein transduction domain
• SARA/SBD fusion protein
• prokaryotic expression
• purification
• biological activity

目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院