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摘要
目的：从炎症理论角度出发，探讨薏苡仁多糖（Coixan）对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）体外炎症模型的干预作用及其机制。方法：体外培养NCM460细胞，采用不同剂量（0、2.5、5、10、20和40μg/mL）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导NCM460细胞，筛选出最佳诱导剂量（20μg/mL）；用不同浓度（0、5、10、20、40和80μg/mL）的Coixan诱导NCM460，筛选出最佳促增殖浓度（10、20、40μg/mL）。实验随机设为空白组、模型组（LPS诱导）、LPS+Coixan低、中、高剂量（10、20、40μmol/L）组，LPS+柳氮磺吡啶（sulfasalazine,SASP）(200μg/mL)组，除空白组外用LPS(20μg/mL)刺激48 h建立UC体外细胞炎症模型后，分别以薏苡仁多糖及SASP进行48 h干预治疗后，ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平；免疫荧光检测焦亡相关蛋白Caspase-1荧光的表达量；采用qRT-PCR技术检测各组NCM460中NLRP3/Caspase-1通路中焦亡相关NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达水平的影响；Western blot技术检测各组焦亡相关NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平的影响。结果：与0μg/mL比较（20μg/mL）LPS诱导48 h对NCM460细胞生长抑制较为适中（P<0.01），同时，干预48 h时，炎症因子IL-1β、TNF-α含量明显升高（P<0.01），因此，选择（20μg/mL）LPS诱导48 h作为造模方式。与0μmol/L的Coixan相比，当Coixan浓度为10、20,40μmol/L时，细胞存活率增高，特别是Coixan浓度为10、20μmol/L(P<0.05)。与正常对照组比较，模型组中炎症因子IL-1β、TNF-α的含量，NLRP3、Caspase-1β、IL-1β蛋白和NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，药物干预组中，中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中细胞IL-1β、TNF-α分泌量减少，差异有统计学意义（P<0.01）；与模型组比较，药物干预组中，高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白Caspase-1表达水平明显下调（P<0.01）；与模型组比较，药物干预组中，低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中NLRP3、Caspase-1蛋白和基因表达明显降低（P<0.05或P<0.01），药物干预组中，高剂量组、柳氮磺吡啶组中GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，药物干预组中，中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白（NLRP3,Caspase-1,IL-1β）表达水平明显下调（P<0.01）。结论：薏苡仁多糖可能通过下调焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的表达水平，从而抑制人结肠上皮细胞的细胞焦亡，发挥人结肠上皮细胞保护作用。
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