可内化的人源抗Met基因工程抗体Fab的亲和力成熟与特性分析

作者：朱进; 赵萍; 焦永军; 王昕; 曹伯良; 冯振卿; 管晓虹

来源：生物化学与生物物理进展, 2007, 34(01): 73-79.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3282.2007.01.010

• 肝细胞生长因子受体
• 噬菌体抗体库
• 亲和力成熟
• 内化抗体 hepatocyte growth factor receptor (Met)
• phage-displayed antibody library
• affinity maturation
• internalized antibody

应用噬菌体展示技术制备抗Met(HGF受体,一个与肿瘤发生、侵袭和转移相关原癌基因产物)特异性、高亲和力的全人Fab片段.Fab基因分三步合成,以从错配PCR突变库中筛选出的Fab基因可变区为模板,扩增VH和VL基因,分别与CH1、CL基因融合,合成Fd和L基因,再拼接合成Fab基因,克隆于pComb3XSS中,构建Fab次级抗体库.经细胞筛选和固相筛选,获得高亲和力阳性克隆.工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析,在25ku和27ku出现预期大小蛋白质条带.Fab分子经流式细胞术、免疫沉淀、细胞免疫荧光检测,结果表明,Fab能够与S114和MKN45细胞膜上的Met胞外区...

• 单位
  南京医科大学; Van Andel Research Institute; 中国人民解放军南京军区军事医学研究所