内质网应激诱导胶质瘤U87细胞替莫唑胺化疗抵抗

作者：黄天造; 林维斌; 陈祥荣; 刘楚彬; 高延磊; 胡伟鹏

来源：中华神经医学杂志, 2018, 17(03): 217-221.

• 神经胶质瘤
• 内质网应激
• 替莫唑胺
• DNA错配修复酶

目的探讨内质网应激对胶质瘤U87细胞替莫唑胺(TMZ)化疗敏感性的影响及其机制。方法 (1)体外常规培养胶质瘤U87细胞,培养24h后加入0、12.5、25、50、100μmol/L TMZ作用24h,MTT检测细胞增殖抑制率,观察TMZ的半抑制浓度(IC50);0、2、4、8μmol/L内质网应激诱导剂衣霉素(TM)处理U87细胞6 h后加入50μmol/L TMZ作用24 h,MTT检测细胞增殖抑制率的变化;(2)将细胞分为对照组、TM组、TMZ组、TM+TMZ组,TM组、TM+TMZ组细胞加入4μmol/L TM预处理6 h,后2组细胞加入50μmol/L TMZ,对照组加入等量培养基。继续作用24 h后流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;Western blotting检测细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、DNA错配修复酶(MGMT)、内质网腔内分子伴侣(GRP78)、磷酸化肌醇需要酶1(IRE-1)的表达。结果 (1)MTT检测显示TMZ对U87细胞的IC50为50μmol/L。与0μmol/L TM+50μmol/L TMZ组、2μmol/L TM+50μmol/L TMZ组比较,4μmol/L TM+50μmol/L TMZ组、8μmol/L TM+50μmol/L TMZ组细胞增殖抑制率均降低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与TMZ组比较,TM+TMZ组细胞凋亡率[(46.98±4.79)%vs(35.74±4.09)%]明显减少,凋亡因子caspase-3和Bax蛋白的表达减少,MGMT、GRP78和IRE-1蛋白的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论内质网应激可增加胶质瘤U87细胞耐药基因MGMT的表达,降低细胞对TMZ的化疗敏感性,诱发细胞产生化疗抵抗。

• 单位
  福建医科大学附属第二医院