抗小鼠干扰素调节因子7多克隆抗体的制备及鉴定

作者：杨锡琴; 邹滔; 张耀林; 张纪岩^*

来源：军事医学, 2022, 46(09): 673-681.

• 干扰素调节因子7
• 表达
• 纯化
• 多克隆抗体
• 鉴定

目的 获得小鼠干扰素调节因子7(IRF7)抗原，制备抗小鼠IRF7多克隆抗体并鉴定。方法 构建原核表达质粒pET‐28a(+)‐IRF7，在大肠杆菌中表达IRF7，用Ni柱纯化获得抗原后，分别采用MnJ胶体锰佐剂和弗氏佐剂制备免疫原，3次免疫后心脏取血分离血清，采用间接ELISA法测定血清效价、纯化试剂盒纯化抗体、Western印迹和免疫沉淀对抗体生物学活性进行鉴定。结果 在大肠杆菌中成功表达IRF7并获得纯蛋白。两种佐剂制备的多抗血清，效价均可达到810×103倍。血清纯化后获得抗IRF7抗体，经Western印迹鉴定，两个多克隆抗体均能够特异识别真核表达的IRF7蛋白，并在免疫沉淀外源表达IRF7时，其效果明显优于商业化抗体。结论 成功制备了抗IRF7多克隆抗体，为后续研究IRF7功能及作用机制奠定了基础。