肿瘤坏死因子α在大肠杆菌周质空间中的表达

作者：武玉露; 夏玲珍; 王佳玲; 成骋; 何冰芳

来源：生物加工过程, 2021, 19(02): 185-192.

DOI：10.3969/j.issn.1672-3678.2021.02.011

• 肿瘤坏死因子α
• 融合标签
• 周质空间
• 大肠杆菌
• 活性蛋白
• 乘客蛋白
• 可溶性表达

开发一种将肿瘤坏死因子α(TNFα)分泌到大肠杆菌周质空间的表达策略。将实验室自主研发的新型融合标签Ffu与TNFα融合后克隆制备成重组质粒pFfu-TNFα。对重组蛋白的表达条件进行优化,通过灰度扫描得重组目的蛋白占总蛋白表达量的76%左右,其中可溶性组分占89%左右;定向释放周质蛋白,Western blotting鉴定重组蛋白的免疫原性:纯化后测定周质空间的重组蛋白Ffu209-TNFα表达量,最高可达12 mg/L。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测重组蛋白对L929细胞的细胞毒活性,结果显示:新型融合标签Ffu可以帮助乘客蛋白TNFα实现大肠杆菌中的高效可溶性表达和周质空间分泌表达,生物活性为3.47×10～5 U/mg。本研究为一些生物活性蛋白,尤其是含二硫键的活性蛋白,在大肠杆菌周质空间表达提供了一个新的工具。

• 单位
  南京工业大学; 台州学院