慢性髓细胞性白血病BCR：：ABL1基因p210转录本实验室自建荧光定量PCR检测方法的性能确认

作者：韩聪; 宋鸽; 马娇; 徐世才; 孙琦; 王慧君; 肖志坚; 姚瑶^*

来源：中华检验医学杂志, 2023, 46(10): 1040-1047.

DOI：10.3760/cma.j.cn114452-20230828-00091

• 聚合酶链反应
• BCR：：ABL1
• 实验室自建检测
• 性能确认

目的建立BCR::ABL1 p210转录本荧光定量PCR(RQ-PCR)实验室自建检测方法和分析性能确认。方法本研究采用欧洲抗癌计划(EAC)公布的BCR::ABL1 p210转录本RQ-PCR检测的引物和探针序列建立了BCR::ABL1 p210转录本RQ-PCR实验室自建检测(LDT)方法, 通过WHO国际参考品获得转换系数(CF), 并使用K562和HL60细胞系混合物构建两个不同水平的实验室内部质控品。回顾性分析慢性髓细胞性白细胞(CML)患者阳性标本, 参考CLSI MM01-A3等指南评价实验室自建BCR::ABL1 p210 RQ-PCR 方法的精密度、正确度、线性范围、分析灵敏度和分析特异性等参数。采用Bland-Altman法对LDT方法与美国FDA批准的BCR::ABL1 p210转录本定量检测体外诊断(IVD)试剂盒检测结果进行一致性分析。结果本中心通过WHO国际参考品校准获得的BCR::ABL1国际标准值(BCR::ABL1IS)的CF为0.535。本研究建立的LDT方法在4个分子学反应(MR)水平(0.5、1.5、2.5、3.5)的BCR::ABL1IS 的重复性变异系数(CV)分别为7.44%、5.33%、9.12%、18.06%, 室内总不精密度CV分别为7.99%、5.49%、10.95%、17.99%。2020至2022年本实验室所有美国病理学家协会(CAP)能力验证(PT)样本的MR值均在CAP允许的变异范围内, MR结果与CAP-PT MR平均值强相关(r=0.999, P<0.01), 所有差值均在一致性界限范围内。本研究建立的LDT方法与Qiagen IVD试剂盒检测结果相关性高(r=0.997, P<0.01)。e13a2转录本的BCR::ABL1IS线性范围为0.001%～7.454%, 最大CV值为64.09%。e14a2转录本的BCR::ABL1IS线性范围为0.002%～12.398%, 最大CV值为43.37%。e13a2转录本和e14a2转录本的最低检测限(LoD)分别为MR5.0(0.001% IS)和MR4.8(0.002% IS);e13a2和e14a2转录本定量检测限(LoQ)均为MR4.7(0.002% IS)。该方法分析特异性为100%, 与BCR::ABL1 p190转录本检测无交叉反应性。结论本实验室自建的BCR::ABL1 p210转录本RQ-PCR定量检测体系分析性能良好, 可满足CML患者BCR::ABL1融合基因的临床检测需求。

• 单位
  实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院血液病医院; 中国医学科学院血液学研究所