猪miR-199a-3p对mTOR基因表达的调控

作者：邱梅玉; 黄涛; 李涛; 孙敬礼

来源：动物医学进展, 2019, (12): 1-5.

DOI：10.3969/j.issn.1007-5038.2019.12.001

• miR-199a-3p
• mTOR基因
• 表达调控

通过生物信息学预测miR-199a-3p与mTOR-3'UTR的结合位点,人工合成猪mTOR-3'UTR及突变型片段克隆至双荧光素酶载体上,构建野生型(psiCHECK-2-W-mTOR-3'-UTR)和突变型(psi-CHECK-2-M-mTOR-3'-UTR)双荧光素酶报告质粒.给PK-15细胞分别转染miR-199a-3p mimics、nega-tive control和mTOR-3'-UTR野生型/突变型双荧光素酶报告载体,用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,分别采用RT-qPCR和Western blot检测mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平.结果表明,将含mTOR-3'-UTR的野生型和突变型双荧光素酶报告质粒与miR-199a-3p mimic共转染PK-15细胞,野生型报告质粒表达的荧光素酶活性显著低于其阴性对照组(P<0.05);转染miR-199a-3p mimics能显著下调mTOR基因mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而转染miR-199a-3p Inhibitor组和Inhibitor-NC组相比,mTOR基因蛋白表达差异不显著(P>0.05).成功构建了猪野生型及突变型mTOR-3'-UTR双荧光素酶报告质粒,通过双荧光素酶试验、RT-qPCR及Western blot证实miR-199a-3p与猪mTOR-3'-UTR存在靶向调控关系.

• 单位
  新疆畜牧科学院; 动物科技学院; 石河子大学