Necdin对大鼠牙胚外胚间充质干细胞成牙分化和矿化的影响

作者：张艺馨; 袁洪燕; 陆明洁; 谢波; 邹续强; 温秀杰^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(13): 1413-1421.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202303095

• 胚胎癌细胞来源分化神经元特异蛋白
• 外胚间充质干细胞
• 成牙本质分化
• 矿化

目的 探讨胚胎癌细胞来源分化神经元特异蛋白(neurally differentiated EC-cell-derived protein, Necdin)对大鼠牙胚外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells, EMSCs)成牙分化和矿化的调控作用。方法 利用免疫荧光染色检测Necdin在E13.5d、E19.5d大鼠牙胚中的表达分布情况。分离培养E19.5d大鼠牙胚EMSCs,流式细胞术鉴定细胞表型，构建Necdin沉默慢病毒感染EMSCs,分为阴性对照组(sh-NC)和沉默组(sh-Necdin)。流式细胞术检测EMSCs凋亡情况，CCK-8法检测EMSCs增殖能力，划痕实验检测EMSCs迁移能力，矿化诱导后通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色、RT-PCR和Western blot观察Necdin对EMSCs成牙分化和矿化的调控作用。结果 免疫荧光显示Necdin在内、外釉上皮和上皮与间充质接触区域呈强阳性表达；牙胚组织来源的EMSCs沉默Necdin后，sh-Necdin组EMSCs凋亡率较sh-NC组增多(P<0.01),与sh-NC组相比，sh-Necdin组EMSCs的增殖能力更强(P<0.01),但迁移能力变弱(P<0.01);与sh-NC组相比，sh-Necdin组碱性磷酸酶染色更浅且矿化结节形成更少；sh-Necdin组EMSCs成牙分化和矿化相关的基因与蛋白表达量明显低于sh-NC组(P<0.05)。结论 Necdin在大鼠牙胚未来成牙分化和矿化区域呈特异性表达，沉默Necdin促进EMSCs凋亡和增殖，但抑制EMSCs迁移以及成牙分化和矿化，Necdin可能在牙发育矿化过程中发挥重要作用。

• 单位
  西南医科大学