应用重组酶介导核酸扩增技术快速鉴定新菠萝灰粉蚧

作者：唐慧骥; 党志浩; 郭长宁; 王晓晶; 苗小星; 郭保生; 徐超

来源：植物检疫, 2019, 33(02): 37-42.

DOI：10.19662/j.cnki.issn1005-2755.2019.02.009

• 新菠萝灰粉蚧
• 重组酶介导核酸扩增
• COI基因
• 鉴定

本文建立了基于重组酶介导核酸扩增(RAA)技术快速鉴定新菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus neobrevipes)反应体系,并利用该技术开展了口岸截获粉蚧的检测与鉴定。通过分析河南口岸常截获的17种粉蚧线粒体COI基因序列,设计筛选了基于RAA技术的新菠萝灰粉蚧的特异性引物,并对其进行条件优化。结果表明线粒体COI基因能准确区分新菠萝灰粉蚧与其他16种粉蚧;新菠萝灰粉蚧RAA特异性引物能稳定扩增出片段大小为323 bp单一条带,最适宜扩增温度为恒温39℃,扩增时间为20～30 min,检测DNA浓度限值为1.6×10-3μg/mL。本文利用RAA技术建立的新菠萝灰粉蚧快速鉴定方法,耗时短,灵敏度高,重复性好,适用于一线口岸初筛鉴定。