表达PEDV S和PoRV VP7蛋白的重组伪狂犬毒株构建

作者：毛汐语; 周雪珂; 殷鑫欢; 邓益超; 龚双燕; 李小璟; 李幽幽; 徐志文; 朱玲^*

来源：微生物学通报, 2019, 46(12): 3345-3354.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.181002

• 猪伪狂犬病毒
• 猪流行性腹泻病毒
• 猪轮状病毒
• 同源重组
• 毒株构建

【背景】猪流行性腹泻、猪轮状病毒病与猪伪狂犬病是严重危害全球养猪业的3种重要传染病,混合感染往往导致猪场更严重的损失。【目的】利用同源重组技术构建共表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S蛋白和猪轮状病毒(Rotavirus,PoRV) VP7蛋白的猪伪狂犬三联基因工程疫苗株,并研究其部分生物学特性。【方法】通过序列比对、蛋白结构分析筛选s基因的475-804 aa和vp7基因的17-339 aa作为毒株构建的目的片段,依次构建了pMD-S、pMD-VP7、pMD-VP7.S克隆载体和pEGFP-VP7.S转移载体。将质粒pEGFP-VP7.S和PRV XJ亲本株同源重组,空斑纯化得到重组毒株PRV (CM),对其稳定性和增殖特性进行研究。【结果】构建了共表达S蛋白和VP7蛋白的伪狂犬基因工程病毒,连续传代20次,均能检测到vp7和s基因,而gE基因阴性;Westernblotting证实2种外源基因在重组病毒中均能实现良好的表达;测定亲本毒株和重组毒株的TCID50分别是10-7.59/0.1 mL和10-7.25/0.1 mL。【结论】获得了伪狂犬基因工程重组弱毒株PRV (CM),外源基因稳定存在,毒力基因稳定缺失,增殖特性差异不大,为PRV、PEDV和PoRV基因工程三联苗研究奠定了基础。

• 单位
  四川大学; 四川农业大学; 生命科学学院