富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

作者：刘铁牛; 张达培; 蒋旭; **锋; 岑维文; 李孟琪; 樊鸿宇; 陈昱晓; 覃晴; 谢莹; 袁志兵

来源：基因组学与应用生物学, 2021, 40(02): 548-555.

DOI：10.13417/j.gab.040.000548

• RNA酶
• 总RNA
• 腺体
• 改良方法

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5%,1.0%和2.0%β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5%,1%,2% β-巯基乙醇。测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响。结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0%,2.0% β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5% β-巯基乙醇组,1.0% β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0% β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0%β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响。综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0% β-巯基乙醇是最佳提取方案。

• 单位
  生命科学研究院; 中国人民解放军陆军军医大学; 广西医科大学