无血清全悬浮培养Vero细胞系的建立及生物反应器培养参数优化

作者：杨惠清; 武发菊; 葛玉凤; 刘小刚; 安芳兰; 刘学荣; 胡永浩^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(01): 54-59.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.01.016

• Vero细胞
• 细胞驯化
• 细胞库
• 生物反应器

为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系，并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进贴壁培养型Vero细胞，通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞，扩增培养后液氮冻存，建立相应的细胞库；复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型等特性进行检定；通过Box-Behnken试验对生物反应器pH、溶氧和搅拌转速等3个培养参数进行优化，确定最优培养参数。结果显示，筛选的Vero悬浮细胞形态呈圆形、饱满、透亮，大小均匀，呈现较好的悬浮生长状态；生长曲线呈S型；细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性；染色体数目为58或60的占75%;用响应面分析法得出的最优培养参数培养Vero细胞，细胞最高密度可达4.5×106 cells/mL。结果表明，成功筛选出了适应无血清悬浮培养的Vero细胞，通过优化培养参数，可在生物反应器中高密度生长。

• 单位
  中农威特生物科技股份有限公司; 甘肃农业大学