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摘要
目的 确定我国 15群 15株问号钩端螺旋体 (简称钩体 )参考标准株和 2群 2株双曲钩体国际标准株携带LipL4 1基因情况 ,构建该基因的原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫原性。方法常规酚 氯仿法提取上述 17株钩体基因组DNA ,高保真PCR扩增全长LipL4 1基因片段 ,T A克隆后测序分型。构建LipL4 1基因原核表达系统 ,SDS PAGE检测重组目的蛋白 (rLipL4 1)表达情况。分别用钩体属特异性TR patocⅠ抗原、rLipL4 1兔抗血清的Westernblot鉴定其免疫反应性和抗原性。分别用显微镜凝集试验 (MAT)、钩体黏附J774A .1细胞模型检测兔抗rLipL4 1血清的交叉凝集效价和黏附阻断作用。结果 15株问号钩体均有LipL4 1基因 ,并可分为LipL4 1 1和LipL4 1 2两种基因型 ,2株双曲钩体则否。 11个LipL4 1 1基因和 4个LipL4 1 2基因克隆之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88.6 1%～ 88.6 7%和 93.2 4 %～ 97.18%。所构建的原核表达系统rLipL4 1 1和rLipL4 1 2的表达量分别占钩体总蛋白的 30 %和 4 0 %。rLipL4 1 1和rLipL4 1 2均能与TR patocⅠ抗血清发生结合反应 ,免疫家兔能产生抗体。rLipL4 1 1和rLipL4 1 2兔抗血清对上述 15株问号钩体MAT效价为 1∶8～ 1∶12 8、1∶16～1∶2 5 6稀释时均能有效地阻断钩体对细胞的黏附。结?
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