一种基于VP6基因的A组轮状病毒拷贝数实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：黄蓉; 蒋鸿超; 李小曼; 王明英; 王美芬; 孙强明; 张桢

来源：中国生物制品学杂志, 2019, (05): 575-578.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002619

• 轮状病毒
• VP6基因
• 实时荧光定量PCR
• 基因拷贝数 Rotavirus(RV)
• VP6 gene
• Real-time fluorescent quantitative RT-PCR
• Gene copy number

目的建立一种基于VP6基因的A组轮状病毒(rotavirus,RV)拷贝数的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。方法提取病毒液中RV基因组RNA,经RT-PCR扩增VP6基因片段,回收PCR产物克隆至pMD-19T载体,将鉴定正确的阳性菌株常规培养制备标准品质粒,建立RT-qPCR病毒拷贝数检测方法,以标准品质粒Ct值为横坐标,拷贝数的对数为纵坐标绘制标准曲线,依据标准曲线方程检测样品中RV拷贝数。结果标准品质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确;获得RV标准品质粒的标准曲线方程为y=-0. 246 3 x+10. 957,R~2=0. 995 5;原倍及稀释度为1×10~(-3)的样品溶...

• 单位
  中国医学科学院医学生物学研究所; 昆明市儿童医院; 昆明医科大学