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摘要
目的 探究碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)药物暴露后染色体序列突变，以及突变与黏菌素耐药之间的关系，为临床合理用药、减少耐药发生提供依据。方法 黏菌素对临床分离株CRKP 12-130最低抑菌浓度 (MIC)为0.25 mg/L，将100 μL该菌过夜培养菌液分别涂布于含2倍～32倍MIC黏菌素的MH琼脂平板上，获取耐药突变株；采用细菌基因组提取试剂盒提取基因组DNA并进行二代测序；通过PCR法检测黏菌素耐药相关基因。结果 从不同浓度梯度黏菌素的MH琼脂平板中各取50个菌落传代10次后作为受试菌株测其MIC，在2倍MIC和4倍MIC黏菌素的MH琼脂平板上选择出的突变株分别有33株和47株对黏菌素耐药(MIC≥4 mg/L)。8倍MIC、16倍MIC和32倍MIC黏菌素的MH琼脂平板上选择出的突变株均对黏菌素耐药。从中挑选40株MIC值不同的菌株进行二代测序，结果显示有15株菌株mgrB基因完全缺失，2株菌株mgrB基因发生部分缺失，2株菌株的mgrB基因中出现替换(G82T)，并导致氨基酸序列改变(G28C)。利用mgrB基因两翼序列进行PCR引物设计，将PCR产物进行电泳后发现，230株耐药突变株中有103株存在mgrB基因的改变。结论 CRKP在不同浓度的黏菌素选择压力下，均会选择出自发耐药突变株。mgrB基因的完全缺失是造成该类自发突变株对黏菌素耐药的最主要机制。
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单位复旦大学附属华山医院; 上海健康医学院
