pHCN4-DsRed Express2慢病毒载体的构建和鉴定

作者：李颖; 高飞; 蔡军; 秦选光

来源：中国心血管病研究杂志, 2010, 8(8): 593-596.

DOI：10.3969/j.issn.1672-5301.2010.08.012

• HCN4
• 慢病毒载体
• Gateway克隆技术

目的 构建超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4启动子(HCN4)重组慢病毒载体并进行鉴定.方法 采用Gateway克隆技术,通过attB×attP反应,构建穿梭质粒pUp-HCN4,而后将pLY/Des2-Puro、pUP-HCN4、pDown-DsRed Express2三个质粒通过attL×attR反应.构建成pLV/EXPN2-Puro-HCN4-DsRed Express2质粒,再转染感受态细胞stb13,孵育扩增,离心纯化.采用PCR方法对重组慢病毒载体进行鉴定.结果 基于位点特异性重组原理,应用Gateway克隆技术构建了多基因共表达的pHCN4-DsRed Express2慢病毒载体,通过提取DNA测序,证明该序列与理论值一致.结论 应用Gateway克隆技术成功构建了pHCN4-DsRed Express2慢病毒载体.

• 单位
  首都医科大学附属北京朝阳医院