NOL8对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

作者：王笑笑; 陈曦; 李敏敏; 宋宁; 孙冬瑗; 蒋英英^*

来源：中国癌症杂志, 2023, 33(01): 45-53.

DOI：10.19401/j.cnki.1007-3639.2023.01.005

• 口腔鳞状细胞癌
• 核仁蛋白8
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

背景与目的：口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是头颈部鳞状细胞癌中最普遍的亚型，其发病机制尚不清楚。核仁蛋白8(nucleolar protein 8,NOL8)作为RNA结合蛋白（RNA-binding protein,RBP），在多种肿瘤的发生、发展中发挥关键作用，但其在OSCC中的作用尚不清楚，本研究旨在探讨NOL8在OSCC中的表达水平，并研究其对OSCC细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法：利用基因表达谱交互分析2(gene expression profiling interactive analysis 2,GEPIA2)、肿瘤免疫评估资源（tumor immune estimation resource,TIMER）、阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析（the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal,UALCAN）及RNA相互作用数据库（the encyclopedia of RNA interactomes,ENCORI）在线分析NOL8在头颈鳞癌组织中的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测NOL8在OSCC细胞中的mRNA表达水平。利用siRNA干扰技术下调NOL8在CAL-27细胞中的表达，形成NOL8敲低组（siNOL8-1,si-NOL8-2）及阴性对照组；通过慢病毒转染技术感染CAL-27及HN6细胞过表达NOL8，形成NOL8过表达组及阴性对照组。分别通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、划痕愈合试验及transwell实验检测NOL8表达水平变化后对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测NOL8表达水平改变后对EMT相关基因E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）和N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达的影响。利用裸鼠皮下移植瘤模型探究NOL8在体内对OSCC细胞增殖的影响。结果：GEPIA2、TIMER、UALCAN及ENCORI在线分析显示，与头颈鳞癌的癌旁正常组织相比，NOL8在头颈鳞癌组织中表达升高；RTFQ-PCR结果显示，与正常对照细胞相比，NOL8在OSCC细胞系中的mRNA表达显著上调。转染si-NOL8-1及si-NOL8-2的CAL-27细胞中NOL8的相对表达量显著低于阴性对照组；敲低NOL8表达后，CCK-8实验、划痕愈合试验及transwell实验结果显示，CAL-27细胞增殖能力、细胞迁移率和细胞侵袭数明显降低。NOL8过表达的CAL-27及HN6细胞中NOL8的相对表达量显著高于对照组；NOL8过表达组中CAL-27及HN6细胞增殖能力、细胞迁移率和细胞侵袭数均显著高于阴性对照组。Western blot结果显示，在CAL-27细胞中，与敲低对照组相比，敲低NOL8后E-cadherin表达升高，N-cadherin和vimentin表达降低；在CAL-27及HN6细胞中，与过表达对照组相比，过表达NOL8后E-cadherin表达下降，N-cadherin和vimentin表达升高。裸鼠皮下移植瘤模型实验发现，与NOL8对照组相比，NOL8过表达组的皮下移植瘤重量显著升高。结论：NOL8在OSCC中高表达，可促进OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭，该作用可能与EMT过程有关。

• 单位
  潍坊医学院; 潍坊医学院附属医院