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摘要
目的:制备携带PreS1基因的重组腺病毒基因治疗载体,研究其对肝细胞的嗜向性。方法:设计合成含PreS1的腺病毒纤毛Fiber基因片段,置换野生型骨架质粒Fiber片段,同源重组法构建重组体rAd-PreS1,酶切鉴定后HEK293包装生成腺病毒,抽提蛋白Western blot检测目的蛋白PreS1表达。重组腺病毒rAd-preS1分别转染人正常肝细胞L02、人肺癌细胞A549、人喉癌细胞Hep2、人卵巢癌细胞SKOV3,同时野生腺病毒rAd作为阴性对照,荧光显微镜下观察各细胞内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达程度,用细胞的病毒滴度值表示,检测其对肝细胞的嗜向性。结果:经酶切鉴定成功构建rAd-preS1载体,Western blot示蛋白分子量大小均约为63 kD目的条带。rAd-preS1感染L02细胞组GFP表达程度明显强于A549、Hep2及SKOV3细胞组(P均是0.000),而A549、Hep2及SKOV3各细胞组间GFP表达差异无统计学意义(P>0.05);对照组各细胞组间GFP表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:含PreS1的重组腺病毒rAd-preS1显示出对人肝细胞具有较强嗜向性,而对非肝细胞无明显效果,这为进一步研究肝脏疾病靶向基因治疗奠定了基础。
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单位重庆医科大学附属儿童医院
