水牛KDM1A/LSD1基因的克隆分析及真核表达载体的构建

作者：赵鑫; 俸云; 沈朋雷; 石德顺^*; 陆凤花^*

来源：中国畜牧杂志, 2019, 55(07): 14-25.

DOI：10.19556/j.0258-7033.2019-07-014

• 水牛
• KDM1A基因
• 克隆分析
• 真核表达载体构建

本研究旨在对水牛组蛋白去甲基化酶KDM1A基因进行克隆,分析并构建真核表达载体,为研究其在水牛体细胞克隆胚胎中的作用提供基础。首先提取水牛卵巢总RNA,利用RT-PCR技术克隆得到水牛KDM1A基因并对其进行生物信息学分析。结果表明:水牛KDM1A基因编码区全长2 625 bp,预测编码874个氨基酸;水牛KDM1A与其他物种同源性较高且与生物分类学保持一致;其所编码蛋白分子式为C2375H3855N805O776S24,理论分子质量为56 872.11;其二级结构由19个α螺旋,47个β折叠,25个T转角和无规则卷曲组成;其高级结构在水牛、黄牛、人之间具有较高的相似性;本实验构建了水牛pcDNA3.1(+)-KDM1A真核表达载体,转染pcDNA3.1(+)-KDM1A可以显著提高水牛耳部成纤维细胞(BFFs)中KDM1A的表达水平;还发现卵母细胞中KDM1A的表达水平显著高于BFFs。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学