活动性肺结核患者PBMCs实时定量PCR内参基因的选择

作者：翟斐; 杨秉芬; 王若; 曹志红; 程小星^*

来源：临床肺科杂志, 2018, 23(11): 1941-1958.

• 内参基因
• 实时定量PCR
• 结核
• 外周血单个核细胞

目的筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因。方法用密度梯度离心方法分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌H37Rv裂解液、CFP-10和ESAT-6多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Trizol提取mRNA,逆转录获得c DNA,然后用6个常用的内参基因ACTB、B2M、DDX5、GAPDH、YWHAZ和18sRNA的特异性引物进行实时定量PCR检测,结果用ge Norm、Norm Finder和Bestkeeper软件进行数据分析。结果 18sRNA基因丰度太高,在PBMCs表达不稳定,DDX5、YWHAZ和B2M的稳定最好,适合作为活动性肺结核患者PBMCs的内参基因,而ACTB和GAPDH稳定性略低。结论筛选出稳定的内参基因DDX5、YWHAZ和B2M,可用于活动性肺结核患者PBMCs基因表达分析。

• 单位
  解放军第三〇九医院; 中国人民解放军军事科学院; 全军结核病研究所