调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析

作者：张冬杰; 刘洋; 汪亮; 李忠秋; 刘娣^*

来源：中国畜牧杂志, 2019, 55(07): 76-81.

DOI：10.19556/j.0258-7033.2019-07-076

• ZBED6基因
• 启动子
• 荧光素酶活性
• 重叠PCR
• 民猪

ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明:ZBED6基因启动子区-2 053～-1 777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1 808～-1 777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显。据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点。

• 单位
  动物科技学院; 东北农业大学; 黑龙江省农业科学院