科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 探讨微小RNA-199a(miR-199a)对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响及对沉默信息调节因子1(SIRT1)的调控作用。方法 构建脑梗死大鼠实验模型，将60只大鼠随机分为假手术组、脑梗死组、miR-199a抑制组、miR-199a阴性对照组、miR-199a抑制+SIRT1抑制组，每组12只。通过神经行为学评估判断大鼠神经功能变化，采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织神经元病理变化，采用流式细胞术检测脑皮质神经元凋亡情况，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组脑组织中miR-199a、SIRT1 mRNA表达水平，并通过蛋白质印迹法(Western blot)检测各组脑组织SIRT1、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量。采用双荧光素酶报告基因系统验证miR-199a和SIRT1的靶向调控关系。结果 与假手术组相比，脑梗死组大鼠脑组织出现变性、神经元坏死情况，神经元凋亡率、Cleaved caspase-3蛋白表达量、神经学评分和miR-199a表达量升高，SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达量降低，差异有统计学意义(P<0.05);与miR-199a阴性对照组相比，miR-199a抑制组神经元坏死程度减弱，脑组织结构逐渐恢复，神经元凋亡率、Cleaved caspase-3蛋白表达量、神经学评分和miR-199a表达量降低，SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达量升高，差异有统计学意义(P<0.05);与miR-199a抑制组相比，miR-199a抑制+SIRT1抑制组神经元坏死及脑组织变性程度加剧，神经元凋亡率、Cleaved caspase-3蛋白表达量和神经学评分升高，SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达量降低，差异有统计学意义(P<0.05); miR-199a阴性对照组以上指标与脑梗死组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-199a可与野生型SIRT1 3′-UTR特异性结合，两者具有靶向调控关系。结论 抑制miR-199a表达可靶向上调SIRT1表达水平，缓解脑梗死大鼠神经元凋亡，改善神经功能。
-
单位海南医学院第二附属医院; 神经内科; 海南西部中心医院
